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紫外分光光度計測DNA濃度的原理及步驟
發(fā)布日期：2017-04-17 瀏覽次數(shù)：14607
使用紫外分光光度計的原理可測的DNA的濃度與純度技術先進，它的原理是：
核酸的大吸收波長為260nm，蛋白質(zhì)為280nm特點，在波長260nm時，1OD值相當于雙鏈DNA濃度為50μg/ml結論，單鏈寡核苷酸的含量為30μg/ml和諧共生，可以據(jù)此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估計核酸的純度適應性強。純凈DNA的比值為1.8,RNA為2.0技術交流。若比值高于1.8說明DNA樣品中的RNA尚未除盡，若樣品中含有酚和蛋白質(zhì)將導致比值降低建設。270nm存在高吸收表明有酚的干擾在此基礎上。紫外分光光度計只能用于測定濃度大于0.25μg/ml的核酸溶液，對濃度更小的樣品前來體驗，可采用熒光分光光度法自主研發。
具體操作步驟：
1.紫外分光光度計先用水在260nm和280nm兩個波長下校零。
2.取質(zhì)粒DNA樣品2μl更加廣闊，用水稀釋100倍損耗，轉(zhuǎn)入紫外分光光度計的石英比色杯中。
3.在260nm和280nm分別讀出樣品光密度值非常完善。如果樣品濃度單位為μg/μl性能穩定，則樣品DNA濃度為OD值的10倍。
4.若OD＜SUB＞260＜/SUB＞/OD＜SUB＞280＜/SUB＞大于1.8支撐作用，說明仍有RNA研學體驗，可以考慮用RNA酶處理樣品，若小于1.8最為突出，說明樣品中含有蛋白質(zhì)或酚落實落細，應再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀純化DNA高效化。
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